紫外分光光度法是根據(jù)物質(zhì)的吸收光譜,來研究物質(zhì)的成分、結(jié)構(gòu)和物質(zhì)間相互作用的有效手段。
紫外可見分光光度計可以在紫外可見光區(qū)任意選擇不同波長的光。物質(zhì)的吸收光譜就是物質(zhì)中的分子和原子吸收了入射光中的某些特定波長的光能量,相應(yīng)地發(fā)生了分子振動能級躍遷和電子能級躍遷的結(jié)果。由于各種物質(zhì)具有各自不同的分子、原子和不同的分子空間結(jié)構(gòu),其吸收光能量的情況也就不會相同,因此,每種物質(zhì)就有其*的、固定的吸收光譜曲線,可根據(jù)吸收光譜上的某些特征波長處的吸光度的高低判別或測定該物質(zhì)的含量。
與紫外可見分光光度計光度準(zhǔn)確度相關(guān)的七大因素:
?、賰x器的雜散光大小;
②儀器的光度噪聲;
③儀器的基線平直度;
④儀器的光譜帶寬;
⑤試樣的來源,包括樣品的制備,取樣的方法;
?、迾悠返闹苽洌ǚQ量、容量、溶劑、試劑、pH值、時間、溫度等;
⑦比色皿的狀況等。
由此可知,光度準(zhǔn)確度或吸光度誤差,是一個綜合性的技術(shù)指標(biāo)。要使用紫外可見分光光度計測得準(zhǔn)確可靠的數(shù)據(jù),必須注重上述幾個方面的影響。否則,不可能得到準(zhǔn)確可靠的數(shù)據(jù)。特別是在分析測試時,如何選擇(或設(shè)定)這些技術(shù)指標(biāo),非常重要。特別應(yīng)該指出的是:在給出吸光度誤差,同時也給出透射比誤差時,二者不能相互矛盾。