采用紫外分光光度法測定肝靈飲品中五味子醇甲進行定量檢測,并對紫外分光光度法進行方法學(xué) 研究。方法 將肝靈飲品通過濃縮,定容,超聲,稀釋等步驟處理,用紫外分光光度計在 254 nm 波長下檢測五味子 醇甲的含量。結(jié)果 本方法在 0. 006 ~ 0. 078 mg /ml 范圍內(nèi)線性關(guān)系良好,R2 = 0. 999 5,回收率為 98. 33% ~ 98. 79% ,相對標準偏差為 0. 34% ~ 0. 85% 。結(jié)論 該方法具有準確度高,精密度好,能夠滿足測定肝靈飲品中五 味子醇甲含量的要求。
肝靈飲品是以五味子、女貞子、甘草、葛根為主 要原料,輔以對羥基、木糖醇、純凈水經(jīng) 提取、濃縮、精制、配制、滅菌、過濾、灌裝、燈檢、包裝 制成具有對化學(xué)性肝損傷有輔助保護作用的飲品。 目前該產(chǎn)品已經(jīng)過毒理試驗為無毒,并且進行經(jīng)動 物功能試驗證明,具有對化學(xué)性肝損傷有輔助保護 作用 的 保 健 功 能。五味子是木蘭科植物五味子 Schisandra chinensis( Turcz. ) Baill 的干燥成熟果實。 五味子為常用中藥,《新修本草》載“五味皮肉甘酸, 核中辛苦,都有咸味”,故有五味子之名〔1〕 。五味子 味酸、甘、性溫,歸肺、心、腎經(jīng),具有收斂固澀,益氣 生津、補腎寧心的功效〔2〕 ?,F(xiàn)代化學(xué)研究結(jié)果表 明,木脂素類成分為五味子的主要成分之一,其中五 味子醇甲具有較好的水溶性,為五味子注射劑等含 五味子的制劑中的主要活性成分。藥理學(xué)研究表 明,五味子醇甲有明顯的安定、鎮(zhèn)靜及抗驚活性,且 對大腦皮層的興奮抑制過程有調(diào)節(jié)作用〔3〕 。因此 肝靈飲品以五味子醇甲作為功效成分,有關(guān)五味子 醇甲含量檢測的方法也逐漸增多,但大部分采用高 效液相色譜法進行檢測〔4 - 6〕 ,此方法雖然檢測準確, 重現(xiàn)性高,但操作復(fù)雜,檢測周期長,費用高〔7〕 。本 文對紫外分光光度法測定肝靈飲品中五味子醇甲含 量進行方法學(xué)研究,旨在為五味子醇甲的含量測定 提供簡便的方法,為企業(yè)的內(nèi)部檢測提供更便捷的 方法。
1 材料與方法 1. 1 材料與設(shè)備 肝靈飲品由吉林紫鑫藥業(yè)股份 有限公司提供; 五味子醇甲標品,購于中國藥品生物 制品檢定所; 甲醇為分析; UV1800型紫外分光光度計; 超聲波處理器。 1. 2 實驗方法 1. 2. 1 原材料處理 準確量取 10 ml 肝靈飲品,并 將其濃縮蒸干,用甲醇定容到 10 ml,在 55℃ 下超聲 波處理 25 min,冷卻,用甲醇定容到 10 ml,得到檢測 樣品。 1. 2. 2 標準曲線的繪制 精密稱取五味子醇甲對照 品 3 mg,置于 10 ml 容量瓶中,用甲醇定容配制成濃 度為 0. 3 mg /ml 的溶液,再分別取 0. 2、0. 8、1. 4、2. 0、 2. 6 ml 于 10 ml 容量瓶中加甲醇定容至刻度〔8〕 ,分別 配制濃度為 0. 006、0. 024、0. 042、0. 060、0. 078 mg /ml 的溶液用于紫外檢測。靜置20 min 后于254 nm 處測 吸光度值,以甲醇溶液作為空白對照。 1. 2. 3 五味子醇甲含量測定 將上述的待測樣品 稀釋 100 倍后在 254 nm 波長下測吸光度值,由標準 曲線求得樣品中五味子醇甲的含量。計算公式: W = C × V × N/m 式中,W - 功效成分含量( % ) ; C - 標準曲線查 得的功效成分濃度( mg /ml) ; V - 樣品所取的體積 ( ml) ; N - 稀釋倍數(shù); m - 總質(zhì)量( g) 。 2 結(jié)果與討論 2. 1 線性關(guān)系試驗 五味子醇甲標準物質(zhì)的含量 與吸光度之間滿足 關(guān) 系 式 y = 35. 390x + 0. 012 6 ( R2 = 0. 999 5) ,結(jié)果表明在本實驗中五味子醇甲標 準品含量在 0. 006 ~ 0. 078 mg 的范圍內(nèi)與吸光度呈 現(xiàn)良好的線性關(guān)系。標 準 曲 線 見 圖 1。樣 品 在 254 nm波長處測定的吸光度值為 1. 530 9,根據(jù)樣品 的吸光 度 得 到 五 味 子 醇 甲 的 含 量 為 4. 29 mg / 100 ml > 2. 8 mg /100 ml,符合企業(yè)標準中對五味子 醇甲含量的規(guī)定。
2. 2 精密度試驗 分別準確吸取稀釋后樣品液各 5 份進行測定,用標準曲線法計算含量。實驗結(jié)果 見表 1。測定樣品中五味子醇甲的平均含量為 4. 274 8 mg /ml,RSD = 0. 419% ,表明該方法精密度 良好。 2. 3 準確度試驗 向已知濃度的檢測樣品中分別 加入低、中、高 3 個濃度的五味子醇甲標準品,再按 照樣品制備方法處理,共準備 6 份,分別測定其吸光 度。實驗結(jié)果見表 2。測定 3 組的平均加標回收率 分別 為 98. 33% 、98. 79% 、98. 50% ,RSD 分 別 為 0. 85% 、0. 58% 、0. 34% 。由此可以得到各組實驗測 得的目標物質(zhì)的回收率,在樣品制備過程中目標產(chǎn) 物損失較少,加標回收率實驗良好。
本實驗采用紫外分光光度法對肝靈飲品中五味 子醇甲的含量進行檢測,測定結(jié)果表明,肝靈飲品中 五味子醇甲的含量為 4. 29 mg /100 ml > 2. 8 mg /100 ml,符合企業(yè)標準中對五味子醇甲含量的規(guī)定,并且 R2 = 0. 999 5,表明五味子醇甲含量在 0. 006 ~ 0. 078 mg /ml 的范圍內(nèi)與吸光度呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。另 外該方法精密度高,準確度良好,加標回收率較高。 因此,紫外分光光度法是測定肝靈飲品中五味子醇 甲含量的一種簡單、快捷、低成本的測定方法。
3 討論 基線調(diào)查目的在于分析居民因白血病死亡原 因,采取相應(yīng)措施,通過調(diào)查得出的結(jié)果為今后制定 有效的干預(yù)方案提供依據(jù),以及開展相關(guān)工作具有 一定的指導(dǎo)意義。根據(jù) 2009 - 2011 年居民死傷原 因報表統(tǒng)計,吉林省居民因白血病死亡居于腫瘤死 因順 位 第 八 位,三年間的白血病死亡率分別為: 1. 30 /10 萬、1. 23 /10 萬和 1. 62 /10 萬。白血病死亡 年齡多分布在 40 ~ 60 歲之間。白血病分類復(fù)雜,且 近年來一直不斷改變〔1 - 2〕 ,其發(fā)病原因與病毒,感 染,放射因素,化學(xué)因素,遺傳因素,環(huán)境因素等多種 因素有關(guān)。如,沈陽市 2002 - 2003 年白血病發(fā)病率 為 4. 83 /10 萬,標化率為 4. 09 /10 萬,較全國白血病 平均發(fā)病率高,其原因分析可能是沈陽市為重工業(yè) 基地,環(huán)境污染嚴重,人群暴露白血病危險因素機會 較多〔3〕 。幾乎所有類型的白血病都與一些共同的 危險因素相關(guān)( 例如電離輻射) ,目前已經(jīng)確定,放 射線引起的腫瘤主要是白血病。經(jīng)常接觸放射線的 醫(yī)務(wù)工作者與工人,發(fā)生癌癥的機會較多。如據(jù)美 國統(tǒng)計,放射工作者患白血病的風(fēng)險較一般醫(yī)生高 8 ~ 10 倍。自 1911 年 Von Jagie 等報告顯示,11 例 放射工作者患白血病后,到 1959 年已有 200 多例報 告,主要為急性與慢粒。至于慢淋,則尚無確實根 據(jù)。目前由于防護設(shè)備的改進,目前放射工作者的 年接受放射線的量,估計是過去的 1% ,即 1 rad,較 大程度降低了發(fā)病率。陳可欣等〔4〕 曾于上世紀 80 年代至 2001 年調(diào)查過天津市白血病的發(fā)病和死亡 情況,調(diào)查結(jié)果也證實白血病的總體死亡率呈緩慢 下降趨勢。目前,隊列的受照人員中大約有 8% 的 實體癌死亡例數(shù)( 46% 的白血病死亡例數(shù)) 可歸因 于輻射照射。因此,應(yīng)加大環(huán)境的綜合治理、避免劣 質(zhì)材料室內(nèi)裝修、增強放射工作單位的自主性管理、 明確崗位責(zé)任制和嚴格規(guī)章制度〔5〕 、減少或避免由 人為因素造成的放射事故,加強各地區(qū)白血病資料 的檢測收集,在各省市及全國建立白血病協(xié)作組,建 立腫瘤登記報告制度、調(diào)查其發(fā)病率〔6〕 ,早期發(fā)現(xiàn)、 早期治療,這樣可以有效地提高治療效率降低病死 率〔7〕 ,做到降低該類疾病的死亡率,提高人民健康水平。
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