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    紫外分光光度計(jì)法測(cè)定人參須根中總?cè)泊嫉暮?/div>
    更新時(shí)間:2018-11-20 點(diǎn)擊次數(shù):2440

    提出人參須根中總?cè)泊嫉暮繙y(cè)定方法。采用紫外分光光度計(jì)法測(cè)定,對(duì)照品為 人參炔醇,檢測(cè)波長(zhǎng)為 230 nm。結(jié)果表明: 人參炔醇在 0. 043 ~ 0. 215 g·L - 1 ,線性關(guān)系良好, r = 0. 999 9,平均回收率與 RSD 分別為 98. 7% 和 1. 6% 。該方法快速簡(jiǎn)便、重復(fù)性好,可用于人 參須根中總?cè)泊嫉暮繙y(cè)定。

    人參系五加科植物 Panax ginseng C. A. Mey 的 干燥根,具有大補(bǔ)元?dú)?、生津止渴、安神益智的?效,為名貴中藥品種[1],其主要化學(xué)成分有人參皂 苷、多糖、甾醇、揮發(fā)油、氨基酸等,此外尚含一種 聚乙炔醇成分,雖然含量極低,但具有重要的神經(jīng) 組織保護(hù)作用和抗癌活性,研究?jī)r(jià)值[2 - 4]。 并測(cè)得含量為 0. 030% ; 1987 年,北川勛[6]鑒 定出人參環(huán)氧炔醇,并測(cè)得含量為 0. 044% ; 隨后 逐漸鑒定出其他聚乙炔醇化合物。目前得到結(jié)構(gòu) 確證的有 10 余種,如表 1 所示。多年來(lái),人們對(duì) 聚乙炔醇成分的研究集中于單體成分的鑒別及測(cè) 定,未見(jiàn)對(duì)總?cè)泊己康臏y(cè)定研究。本文以人參 須根為研究對(duì)象,選擇人參炔醇為對(duì)照品,提出了 人參須根中總?cè)泊嫉淖贤夥止夤舛扔?jì)測(cè)定方法, 探索有效部位含量,為人參須根的綜合開(kāi)發(fā)利用 提供依據(jù)。

    1 儀器與試藥 UV1901PC(奧析科學(xué)儀器有限公司); KQ-500DB 型數(shù)控超聲波清洗器( 昆山市超聲儀器有限公 司) ; RE-52A 型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀( 上海亞榮生化儀器 廠) ; TB-215D 型電子天平( 北京賽多利斯儀器系 統(tǒng)有限公司) 。 人參須根購(gòu)于吉林參茸有限責(zé)任公司,經(jīng)重 慶理工大學(xué)藥學(xué)與生物工程學(xué)院傅善權(quán)副主任技 師鑒定為實(shí)。 人參炔醇對(duì)照品,重慶理工大學(xué)藥學(xué)與生物 工程學(xué)院制備,批號(hào)為 100410,經(jīng) HPLC 歸一化測(cè) 定含量不低于 98% 。所用試劑均為市售分析純。 2 方法和結(jié)果 2. 1 對(duì)照品母液的制備 精密稱取人參炔醇 4. 30 mg 于 10 mL 容量瓶 內(nèi),甲醇定容,制成 0. 43 g /L 的對(duì)照品母液,備用。 2. 2 樣品的提取與分離 取經(jīng) 干 燥 粉 碎 過(guò) 60 目篩的人參須根粉末 1. 0 kg,加入 10 倍藥材量的沸程為 60 ~ 90 ℃ 的石 油醚回流提取 1 h,提取 3 次,合并濾液,減壓濃 縮,得粗提物。將粗提物經(jīng)硅膠柱層析分離,洗脫 劑體積比為石油醚∶ 乙酸乙酯 = 10∶ 1,對(duì)炔醇成分 進(jìn)行分段收集,合并流分,55 ℃ 減壓濃縮,得紅棕 色油狀物 1. 127 6 g。對(duì)總?cè)泊歼M(jìn)行 TLC 檢查, 10% 硫酸乙醇顯色,結(jié)果呈黑褐色。 2. 3 供試品溶液的制備 精密稱取人參炔醇13. 10 mg 于50 mL 容量瓶 內(nèi),甲醇定容,制成 0. 262 g /L 的供試品溶液,搖 勻,備用。 2. 4 測(cè)定波長(zhǎng)的選擇 精密吸取對(duì)照品母液 2. 0 mL,置 5 mL 容量瓶 中,甲醇定容,搖勻,作為對(duì)照品溶液。同時(shí)取供試品溶液,以相應(yīng)試劑為空白,立即在紫外分光光 度計(jì)于 190 ~ 500 nm 掃描。對(duì)照品與供試品的 大吸收波長(zhǎng)均在 230 nm,因此選取 230 nm 作為檢 測(cè)波長(zhǎng)。 2. 5 線性關(guān)系考察 分別精密量取本文 2. 1 節(jié)制得的對(duì)照品母液 0. 5、1. 0、1. 5、2. 0、2. 5 mL 于 5 mL 容量瓶?jī)?nèi),甲醇 定容,搖勻,以相應(yīng)試劑為空白,用紫外分光光度 計(jì)在 230 nm 處測(cè)定吸光度,以質(zhì)量濃度( g /L) 為 橫坐標(biāo),吸光度( A) 為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。經(jīng)線 性回歸分析處理得回歸方程為: A = 4. 011 6C + 0. 008 3( r =0. 999 9) 。結(jié)果表明吸光度與對(duì)照品濃 度在 0. 043 ~0. 215 g /L 呈良好線性關(guān)系。 2. 6 精密度實(shí)驗(yàn) 精密 吸 取 本 文 2. 1 節(jié)制得的對(duì)照品母液 2. 0 mL,置 5 mL 容量瓶中,甲醇定容,搖勻,230 nm 下測(cè)定吸光度,結(jié)果 RSD 為 0. 5% ,表明儀器 精密度良好。

    2. 7 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 取本文 2. 3 節(jié)制得的試品溶液,分別在 0、2、 4、8、16 h 測(cè)定吸光度,結(jié)果 RSD 為 0. 7% ,表明供 試品溶液在 16 h 內(nèi)穩(wěn)定。 2. 8 重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 取本文 2. 2 節(jié)制得的總?cè)泊紭悠?,按本?2. 3 節(jié)的方法制備 6 份,分別測(cè)定吸光度,結(jié)果 RSD 為 0. 9% ,表明該方法的重復(fù)性較好。 2. 9 回收率實(shí)驗(yàn) 取已知含量的總?cè)泊紭悠?6 份,2 份為 1 組, 分別按高、中、低濃度加入人參炔醇對(duì)照品,按本 文 2. 3 節(jié)的方法制備,測(cè)定吸光度,吸光度均在本 文 2. 5 所述的線性范圍內(nèi)。計(jì)算人參炔醇平均回 收率與 RSD 分別為 98. 7% 和 1. 6% ,加樣回收率 計(jì)算公式如式( 1) 所示,結(jié)果表明該方法準(zhǔn)確度較 好( 見(jiàn)表 2) 。 回收率( % ) = ( 測(cè)得量 - 樣品已知含量) /加 入對(duì)照品量 × 100%。

    2. 10 樣品含量測(cè)定 取 3 批人參須根藥材各 100 g,按本文 2. 2 節(jié) 的方法制備總?cè)泊紭悠?,按本?2. 3 節(jié)的方法制 備成供試品溶液,在 230 nm 下測(cè)定吸收值,由線 性方程計(jì)算 3 批總?cè)泊紭悠分锌側(cè)泊己?,并?此計(jì)算出藥材中總?cè)泊己俊?/p>

    3 討論 本實(shí)驗(yàn)曾采用乙醇、乙酸乙酯和石油醚回流 提取,結(jié)果顯示乙醇和乙酸乙酯提取雜質(zhì)較多,而 采用石油醚提取可以除去大量強(qiáng)極性及中極性雜 質(zhì),大大簡(jiǎn)化了后續(xù)分離過(guò)程,并通過(guò)正交優(yōu)化得 到工藝,方法提取率高,是一種理想的聚乙炔 醇提取方法。 分離過(guò)程中考察了不同洗脫劑( 石油醚 - 、石油醚 - 乙酸乙酯、石油醚 - 環(huán)己烷等) ,洗脫 劑比例以及流速因素對(duì)分離效率的影響,終選 定的洗脫劑的體積比為石油醚∶ 乙酸乙酯 = 10∶ 1, 分離度較好,且毒性較小,經(jīng)過(guò)一次柱層析就能得 到較高純度的總?cè)泊?,遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于國(guó)家規(guī)定 50% 的 要求,適于工業(yè)化生產(chǎn)。 人參為名貴中藥,對(duì)皂苷類主要成分的研究 已較為深入,但對(duì)聚乙炔醇的研究較少,對(duì)人參須 根中聚乙炔醇的含量測(cè)定還未見(jiàn)報(bào)道。本文重點(diǎn) 對(duì)人參須根中總?cè)泊歼M(jìn)行了 UV 定量測(cè)定,確定了 有效部位含量,并為人參須根的綜合開(kāi)發(fā)利用提 供依據(jù)。

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